引起试管母种染菌的15种原因和解决办法

引起试管母种染菌的15个原因和解决办法

前言

根据多年的食用菌经验，总结了试管母种染菌的15种原因、表现和解决方法。

试管母种是食用菌生产的基础，必须要保证试管母种的纯度和活性，其中纯度是活性的前提。固体菌种工艺：1支母种一6瓶原种一>300袋栽培种一>15000袋出菇菌包（数量为举例）液体菌种工艺：1支母种一→4个摇瓶菌种一>4个发酵罐>150000袋出菇菌包(数量为举例)由上可以看出保证母种纯度的重要性，然而很多食用菌生产者并不能保证母种的纯度，甚至会出现母种明显染菌的情况。母种染菌，后续的生产则无法顺利进行，必须要找到母种染菌的原因并加以解决。根据多年的食用菌经验，总结了试管母种染菌的15种原因、表现和解决方法。

1、棉塞制作不合格

染菌表现：污染的试管母种数量较少，染菌部位在培养基表面。细菌、酵母菌、霉菌感染都有可能，细菌和酵母菌感染的几率要大于霍菌。

解决办法：棉花要使用优质的新疆长绒棉，切勿使用便宜的再生棉，更不要使用脱脂棉，也不要使用旧棉塞。棉塞制作要松紧适中，不能太紧，也不能太松，太紧影响以后培养时的透气性，太松就容易导致母种染菌。

2、硅胶塞质量不合格

染菌表现：解决办法：使用进口硅胶塞，如果不具备使用进口硅胶塞的条件，建议使用棉塞，尽量不要使用带有砂芯的硅胶塞。

3、分装时试管口内壁粘有培养基

染菌表现：试管母种的棉塞或者硅胶塞与试管

接触部位出现染菌，一般从外表看起来是霉菌感染，而实际也可能是细菌感染，只是棉塞感染细菌不容易被发现，但是在以后使用时会带来影响。

解决办法：使用合理的分装工具和方法，避免分装PDA培养基时试管口内壁粘到培养基。

4、灭菌不彻底

染菌表现：以灭菌为批次整批的出现染菌，即一批灭菌的试管母种大部分染菌，在同一批中感染杂菌的种类较多，细菌、酵母菌和霉菌都可能存在，即使是霉菌也能有几种。染菌的部分在斜面上没有规律，早期点状萌发，需要注意的是培养基内部也可能出现杂菌菌落，这是判断是灭菌不彻底的重要依据。

解决办法：灭菌温度121° C，30min一45分钟，只要操作正确一般是不会出现灭菌不彻底的情况的，建议有条件的工厂和个人尽量购买专用的医用灭菌锅，手动和全自动的都可以，按照灭菌锅厂家的说明书操作，注意一定要排干净冷空气。

5、灭菌时棉塞或者硅胶塞受潮甚至进水

染菌表现：棉塞或者硅胶塞本身出现染菌，一般从外表看起来是霉菌感染，而实际也可能是细菌感染，只是棉塞感染细菌不容易被发现，但是在以后使用时会带来影响。

解决办法：试管母种培养基在灭菌的时候，不要用塑料或者牛皮纸包起来，正确的做法是在试管培养基的上面覆盖一层塑料或者牛皮纸。

6、没有进行烘干棉塞或者烘干不好染菌表现：表现同5

解决办法：灭菌结束，利用灭菌锅的余温，烘干棉塞 10-15min

7、灭菌后倒吸

染菌表现：倒吸引起的染菌种类一般是细菌或者酵母菌，是因为细菌和酵母菌比较小，因倒吸穿透棉塞进入试管更加容易。倒吸引起染菌的菌落早期一般是单个的，后期酵母菌生长的范围会较大，菌落的部位可以在培养基表面，也可以在培养基的内部。

解决办法：灭菌结束，自然降压，在灭菌锅压力表没有归“0”前，缓慢的打开放气调，避免灭菌出现负压，从而避免倒吸。同时要保证灭菌室的环境洁净，棉塞或硅胶塞的过滤效果要有保证。

8、冷却环境不好

染菌表现：表现同7，解决办法：摆斜面的房间应该干净，提前进行适当的消毒处理，最好在万级净化室进行摆斜面。

9、原母种染菌

染菌表现：规律性比较明显，染菌出现在同一支母种转接的试管母种当中，数量也会比较多，严重时全军覆没。染菌的位置在接种块上或者周边，一般是感染同一种杂菌，细菌、酵母菌、霉菌都有可能，细菌感染可能性大。

解决办法：原始试管母种来源要可靠，对于不具备一定的设备和技术条件情况下，不建议进行组织分离和菌种保藏，在外购试管母种的时候避免高温以及结冰情况出现。

10、试管培养基存放时间过长

染茵表现：一般感染霉菌，染菌的位置是棉塞，或者斜面靠近试管口的位置，尤其以青霉菌、绿霉菌较为常见。

解决办法；计划好母种培养基的制作数量，一次用完，不要存放时间过长。

11、试管培养基存放温度过高染菌表现：表现同10，解决办法：母种培养基可以短期存放，建议存放时间不超过10天，存放温度不要超过22°C。

12、接种环境

染菌表现：在经过处理的环境中接种，出现的染菌一般为细菌，染菌的部位在试管培养基表面，在同一批转接母种中少量染菌。

解决办法：接种箱消毒要彻底，尽量使用超净工作台，记住符合条件的超净工作台效果一定比接种箱要好。

13、接种操作染菌表现：一般染菌的数量不会太多，感染细菌和酵母菌的可能性要大于感染霉菌可能，感染部位比较清晰，在接种块上或者附近，以及接种工具碰到的位置。

解决办法：加强试管母种接种的操作技能，制作精良的接种工具，严格的进行无菌操作。

14、培养环境不好，染菌表现：培养环境引起的试管母种染菌几率较小，一般是细菌感染，感染早期是单一菌落，每支试管母种感染的菌落数量也较少。环境不好引起的母种染菌和棉塞制作有关系。

解决办法：不要忽视试管母种培养环境，尽量单独设置一个房间用恒温培养箱培养，保持房间干净，有条件就一定要做成万级净化。

15、培养温度高染菌表现：染菌位置在培养基表面不确定位置，一般感染的是细菌或者酵母菌。解决办法：按照正常合适的温度培养，避免出现因制冷设备故障导致的25°C以上情况出现，有条件一定要使用生化培养箱。很多人认为在食用菌生产中试管母种制作比较简单，很多工厂技术员的操作，相当一部分的操作是不够严谨的，存在一定的染菌几率，需要进行规范。