PDA培养基的制作，适合各种食用菌

羊肚菌、母种组织分离、原种、栽培种、营养包、详细制作过程 PDA培养基的制作

 (一)所需材料

     1、器材：电磁炉(液化气炉) 量杯刀 切菜板 不锈钢锅 筛箕等 2、原料配方(1倍量即70至80支试管左右) 土豆250克(含皮，如去皮即200克) 琼脂20克 维生素B1 2片（每片10毫克） 口服葡萄糖20克 蛋白陈3—5克 （有些食用菌品种可以加入磷酸二氢钾和硫酸镁，小麦粉等）清水1000毫升（指熬煮好后的量，因在熬煮小麦杨(克酸二 件的克璃关0.6的过程中会蒸发水份，所以在实际操作中要多加200—300毫升) (二)制作过程 1、土豆清水洗净——去皮——清水洗净——切成大小均匀的小丁（土豆一定要洗净，否则煮汁后的杂质，影响后期的观察；土豆切丁大小要均匀，不然煮熟程度会不一致；选择土豆是要注意，要选新鲜的，不要选择已发芽的及被太阳晒过有绿皮的). 

2、将切好的土豆丁放入洗净的不锈钢锅中——加入1300-1500毫升的清水——开火煮（先猛火，煮沸后改文火，煮沸后要注意搅拌，以防糊锅)——煮至土豆丁熟而不烂即停火（即用手捏土豆丁即粉碎，但所捏土豆丁的形状与未煮前的形状未有任何变化的为好)。 3、将煮好的土豆及汁液倒入筛箕(垫上纱布或用滤网、毛 2 巾)过滤取汁(过滤的土豆汁无杂质，接近透明为佳，经过第一次煮，水份为蒸发100-200毫升)——将不锈钢锅刷净——倒入过滤好的土豆汁——加入琼脂20克，维生素B12片(每片10毫克)，口服葡萄糖20克，蛋白陈3-5克(加入这些原料的顺序不分先后)——开火熬煮(注意要边熬边搅拌，以防糊锅；先猛火，煮沸后改文火；熬煮过程中如水份蒸发过多，中途可加适量的水补充)——熬煮至锅内的琼脂全部融化即可停火(锅内绝大部份琼脂融化即可)，即成培养基。

4、将熬煮好的培养基趁热装入180x18mm规格的试管中，灌装的量以达试管总量的四分之一(1/4)为宜(不能灌装过多；事先要洗净试管并晾干，准备好导管及2个死水夹，装试管时导管最好伸入试管中部再打开死水夹注入培养基，以防培养基粘到试管口，如培养基粘到试管口须用干净的布擦净）。灌装好后将试管呈一定角度斜立放(利于散热，试管口朝上)，在室温下静置4—5个小时，使培养基凝固。

(要趁热尽快灌装，否则培养基冷却后会凝固，如有条件可将熬煮好的培养液装入保温桶（壶）中可延长灌装时间.）

最简单易行的方法是让培养基凝固，然后切条装入试管。

5、将装有已凝固的培养基试管用普通棉花做成棉花塞塞紧试管口(塞入试管1-1.5cm深度为宜，用普通棉花，不得用脱脂棉花；塞试管时一定要塞紧，宜紧不宜松)。

6、高温高压灭菌：将塞好棉花塞的试管(试管口朝上）直立放入高压灭菌锅的同胆里（量少的要放入其他物品填充，确保试管直立着)，在高压灭菌锅内加入清水至与锅底的三个支脚的上部齐平即可，放入已装好试管(装有培养基)的锅胆，盖上锅盖，拧紧螺旋(注意要对角拧，不然会漏气)，关闭各气压阀一将高压灭菌钢放上火炉，开火加热(或通电加热)——等高压锅上压力表指针指到 0.05mpa 时,我开低压阀(冷气阀)排泻锅内冷气(使锅内受热均匀)30-40秒(即当压力表指针指到0.01-0.02mpa即可)，并闭低压阀(或冷气阀，注意在排泻冷气时不能熄火，要继续加热。)——继续加热——等高压锅压力表指针指到0.15mpa时开始计时，注意调节火力大小，保持锅内0.15mpa压力40分钟方可停火。(指针指到0.15mpa时，用通过调节火力保持0.15mpa压力40分钟)

高压灭菌锅加热灭菌过程要有人值守，防止小孩靠近，注意安全操作！

7、停火后让高压灭菌锅自然冷却(压力表指针归零)，打开排气阀——拧开螺旋，开锅——取出装有培养基的试管——斜着放在事先做好的呈1cm垂直落差的平台上(先试管底放在平台上，试管口朝上，斜放)，即摆成斜面，使试管内的培养基也呈斜面，注意在摆斜面的过程中，一定要让试管底先着平台面，再轻轻将试管口靠在较高的平台边上，一定不能让培养基粘到棉花塞，一旦粘着即要作废，不能再用！ ①

8、摆好呈斜面的培养基放置在常温下7一10天 (注意室内要通风，温、湿度不限），让试管内水份全部蒸发后方可进行母种克隆或转管扩繁。在常温下，经灭菌后的培养基可放置保鲜冰柜三个月至半年。(培养基不同存放时间有别，)即在确定好克隆或转管前至少提前一周制作好培养基。

注意高压灭菌时间宜长不宜短，用棉花塞试管宜紧不宜松（一般捏着露在试管口外的棉花能将整个试管提取即可）培养基在高温灭菌前呈乳白色，灭菌后会变成深黄色